快看青旗是如何使用ATCC細胞庫的！

　　ATCC細胞庫通常保存在凍存管中用干冰運輸，或是在培養瓶中常溫運輸。但對于國內客戶，由于運輸時間稍長，都是采用干冰運輸的方式。在收到ATCC細胞后，很重要的一點是迅速解凍使其立即復蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養基中。如果做不到上面這點，需將細胞存儲在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細胞儲存在高于-130℃的溫度下，這會使細胞存活率迅速下降。

 

　　ATCC細胞庫的使用方法：

　　1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

　　取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或隔夜，以穩定細胞狀態。然后，用75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，收集瓶內液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml培養基重懸，全部接種到25cm2培養瓶中，再放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養。如果離心后細胞量很多，可以直接1:2分瓶培養。

 

　　2、細胞傳代：細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時，收集瓶內液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml培養基重懸細胞，按1:2的比例進行接種傳代，接種到25cm2培養瓶中，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養，2-3天更換培養液。換液的步驟同細胞NK-92細胞，ATCC細胞，培養技術傳代步驟。

 

　　3、細胞凍存：

　　①細胞生長至覆蓋培養瓶的85%及以上面積時，收集瓶內液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細胞，并放置于凍存管中。

　　②先將細胞凍存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉入液氮中進行長期保存。

 

　　4、細胞復蘇：

　　①從液氮中取出細胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

　　②將凍存管中的細胞移至含有5ml培養液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min。

　　③棄上清，沉淀細胞用6ml培養基重懸，接種到培養瓶中，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養。

　　④第二天，換用新鮮培養基繼續培養。